欧美乱码中文字幕在线观看|国产美女av在线免费观看|亚洲天堂精品视频在线观看|日韩综合一区二区三区在线观看|亚洲专区视频在线观看免费

當前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  細胞房細胞或組織培養(yǎng)過程及所需儀器設備

細胞房細胞或組織培養(yǎng)過程及所需儀器設備

更新時間:2024-06-27  |  點擊率:414

什么是廢液抽吸?

廢液抽吸(aspiration/suction)為現(xiàn)代生物學技術(shù)中常用的技術(shù),用以移除廢棄液體。生物學中常見的細胞培養(yǎng),是將真核或原核細胞培養(yǎng)于適宜的培養(yǎng)液(culture medium)及環(huán)境中,使其在受控制的狀態(tài)下生長(growth)及增殖(proliferation)的過程。細胞培養(yǎng)的流程包含解凍細胞、培養(yǎng)(cell culture)、繼代培養(yǎng)(俗稱分盤,cell subculture)及冷凍細胞等步驟。

然而,細胞生長過程中會產(chǎn)生代謝物、細胞碎片等廢棄物影響細胞健康,甚至導致細胞凋亡。因此在細胞培養(yǎng)過程中,需定期更換培養(yǎng)液,而移除舊有培養(yǎng)液、洗滌液的行為,則為廢液抽吸。


 2773d7d3e002d4141f249b6b8d7ce348.png

真空廢液抽吸裝置(suction system,aspiration system)常見如上圖,主要包含:

真空瓶(vacuum flask)
緩沖瓶(safety bottle)
過濾器(filter)
真空源(vacuum source)

連接并啟動真空源后,細胞培養(yǎng)瓶/皿中的廢液會因壓力差而被抽吸、收集至真空瓶,緩沖瓶則做為防溢裝置使用,以避免廢液被抽吸至真空源內(nèi)。過濾器可使用HEPA濾膜(High Efficiency Particulate Air filter0.22µm過濾器,以過濾掉廢液及空氣中的粒子、確保抽吸效率。

細胞培養(yǎng)流程

細胞培養(yǎng)前,請確認操作環(huán)境符合無菌操作條件,且應避免和細菌實驗共享設備,以防污染。

解凍細胞(thawing cells):將冷凍細胞以37 oC快速解凍、回溫,以避免細胞損傷。

培養(yǎng)(cell culture):依據(jù)細胞種類和濃度,將細胞和培養(yǎng)基均勻混合后,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

繼代培養(yǎng)(cell subculture):當細胞生長至一定程度后,收集細胞,分殖于新的培養(yǎng)基中。

進行繼代培養(yǎng)時,其依細胞種類不同,處理方式可分為以下兩大類:

a.附著型細胞(adherent cell),又稱貼壁培養(yǎng)、單層培養(yǎng)(monolayer culture)

去除舊培養(yǎng)基廢液

Phosphate buffered saline(PBS)洗滌細胞一至二次

加入trypsin-EDTA溶液,于37 oC下作用2~20分鐘,使細胞可自培養(yǎng)瓶/皿中脫落

加入含有血清的新鮮培養(yǎng)基中,以終止胰蛋白酶作用

將脫落的細胞及其團塊打散、混合均勻后,收集所有液體

離心后移除上清液,并添加新鮮培養(yǎng)基,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶/皿中進行培養(yǎng)

b.懸浮型細胞(suspension cell),又稱懸浮培養(yǎng)(suspension culture)

將細胞培養(yǎng)液以1000 rpm離心5分鐘后,吸除上清液

加入適量新鮮培養(yǎng)基,與沉淀細胞混合均勻后,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶/皿中進行培養(yǎng)。

冷凍細胞(cryopreservation):獲得目標細胞株后,將細胞懸浮于含有5~10%DMSO(二甲基亞砜,dimethyl sulfoxide)30~50%FBS(胎牛血清,Fetal Bovine Serum)的新鮮培養(yǎng)液中,以-80 oC或液態(tài)氮等低溫設備保存。

細胞計數(shù)(cell counting):用以計算細胞濃度,可利用傳統(tǒng)血球計數(shù)器(Neubauer chamber)或自動計數(shù)器,計算細胞濃度可用來判斷目前細胞生長的情況。

廢液抽吸方法的比較

廢液抽吸目前有多種方法可以進行。早期實驗室多利用移液器(pipette)或電動吸管抽吸廢液,然而因為需要重覆抽吸及排除液體,長時間使用下來易造成手部不適及疲勞。除此之外,電動吸管須搭配無菌刻度吸管使用,而現(xiàn)多使用拋棄式吸管排除污染疑慮,因此一次實驗下來通常會產(chǎn)生大量廢棄物,造成環(huán)境負擔。

現(xiàn)代實驗室則普遍會自行購置真空幫浦搭配真空瓶自行組裝,如此會較電動吸管有效率,且設備取得較容易,然而自組式系統(tǒng)常見許多例如:管線配置不良,造成工作環(huán)境混亂、或是玻璃吸管經(jīng)常破裂等安全性上的缺點。

Lafil廢液抽吸系統(tǒng)及BioDolphin廢液抽吸套件主要為生命科學細胞培養(yǎng)或?qū)嶒炦^程中溶液抽吸應用,可直接放置于無菌無塵操作臺(laminar flow)使用。Lafil廢液抽吸系統(tǒng)整合真空源、真空瓶與廢液抽吸套件,提供實驗室一體化解決方案,更比傳統(tǒng)廢液抽吸系統(tǒng)減少一半臺面占用面積,并使用圍籬式平臺固定真空瓶,避免操作者不小心碰觸瓶身而傾倒。

洛科Lafil廢液抽吸系統(tǒng)及BioDolphin廢液抽吸套件

 a543367800189c28228427f19b645e3b.png

?洛科 Lafil200-BioDolphin?
 

/

實驗室電動吸管

自組真空抽吸系統(tǒng)

洛科廢液抽吸系統(tǒng)

Lafil 100

Lafil 200

整合式設計

是,單一產(chǎn)品

是,一體化all-in-one設計

抽吸耗材

無菌刻度吸管

吸管尖 (tip)

吸管尖 (tip)

長時間操作

易造成手部肌肉疲勞

易造成手部肌肉疲勞

符合人體工學、單手退tip設計

吸力調(diào)節(jié)

廢液清除

每次抽吸排凈

吸取至真空瓶滿后清除

吸取至真空瓶滿后清除

真空瓶

通常為 1 L 抽氣瓶

1 L PP 
或硼硅玻璃瓶

4 L PP
或硼硅玻璃瓶

幫浦/設備保護

廢液溢漏危險

高風險

置入無菌操作臺

不可

不可

空間利用性

體積小

管路雜亂占空間

可省去自組系統(tǒng)50~65%空間

環(huán)境友善

易產(chǎn)生大量拋棄式廢棄物

易產(chǎn)生大量拋棄式廢棄物

所有配件采用耐高溫高壓滅菌材質(zhì),另有節(jié)能安靜的eco機種

特殊需求

Lafil 200支援2人同時抽吸

細胞培養(yǎng)實驗室基礎設備

無菌操作臺,或生物安全柜
Laminar Flow Hood Biological Safety Cabinet, BSC (Class II)

無菌操作臺可作為實驗室內(nèi)的無菌工作區(qū),同時也可遏止各種于微生物實驗程序中可能產(chǎn)生的傳染性飛濺物或氣膠。

培養(yǎng)箱
Incubator

使用培養(yǎng)箱的目的是為細胞生長提供舒適的環(huán)境。培養(yǎng)箱可透過控制溫度、濕度和二氧化碳濃度提供細胞適合的生長條件。

廢液抽吸系統(tǒng)
Suction System (Aspiration System)

使用廢液抽吸系統(tǒng),可以更輕松地從細胞培養(yǎng)容器中吸除培養(yǎng)基和試劑。

光學顯微鏡
Optical Microscope

光學顯微鏡是細胞培養(yǎng)工具,如正立顯微鏡、倒立顯微鏡。其將細胞可視化,以監(jiān)測細胞生長情形、細胞形態(tài)、計數(shù)與識別污染物質(zhì)。

低溫儲存設備
Cryogenic Storage

隨著傳代次數(shù)的增加,連續(xù)培養(yǎng)的細胞可能會出現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定性,如遺傳漂變、哀老; 因此將它們保存在低溫儲存設備中以供長期儲存是細胞培養(yǎng)中重要的步驟。

水浴器
Water Bath

細胞實驗室普遍會將水浴槽設置為37 oC,用于預熱培養(yǎng)基以及解凍冷凍細胞或試劑等。


廢液處理與廢棄辦法

含有危險化學品(如氯)之有機廢液應收集至設有適當標示之專用廢液桶,不含危險化學品之其它廢液可一并收集于一般混合廢液桶,廢油則需收集于廢油桶中。細胞培養(yǎng)用的廢液應加入適當濃度的消毒劑,如漂白水(次氯酸鈉Sodium Hypochlorite),使細胞致死,再倒入水槽或廢液桶。培養(yǎng)皿等生物醫(yī)療相關(guān)廢棄物則應置于生物醫(yī)療廢棄物袋中,進行高溫高壓滅菌后以一般廢棄物丟棄,或是請依照我國生物醫(yī)療廢棄物相關(guān)規(guī)定處理。

更多詳細
洛科儀器股份有限公司
廈門洛肯儀器有限公司